Образ невесты Подготовка к свадьбе Организация свадьбы Развлечения на свадьбе Поздравления и тосты на свадьбу Свадебные приметы, горосокопы и гадания

Техника окрашивания корней


Как покрасить корни волос в домашних условиях?

Окрашивание волос

Владелицы окрашенных волос рано или поздно сталкиваются с проблемой отрастающих корней естественного цвета. Для того чтобы сохранять гармоничный облик, необходимо регулярно окрашивать их в подходящий оттенок.

Общие принципы окрашивания

Профессионалы рекомендуют использовать для окрашивания корней волос ту же краску, что и применялась для обработки общей массы волос. Это позволит получить максимально естественный результат. Если же применяется иная краска, то сперва стоит провести тестирование на возникновение аллергических реакций. Делается это следующим образом: на кожу сгиба локтя наносится небольшое количество краски, выжидается некоторое время. Если кожу начнет щипать, возникнет ощущение жжения или иные неприятные проявления, то использовать данный продукт не рекомендуется. Проверка осуществляется где-то за пару дней до проведения окраски. В принципе, профессионалы рекомендуют ее на всякий случай проводить, даже если данная краска уже применялась для обработки волос.

Во время окрашивания важно действовать по инструкции и не оставлять средство на большее количество времени. Часто несоблюдение данного правила приводит к ожогам кожи головы. Категорически запрещается использование металлических емкостей для разведения краски: произойдет реакция, в результате которой возникнет оксид, из-за которого оттенок может поменяться.

Ни в коем случае не стоит добавлять в краситель сторонние растворы, например бальзамы или шампуни: это не только не обогатит состав, но и изменит оттенок.

Прокрашивать корни нужно сразу же, как будет готов раствор. Волосы должны быть сухими, так как влажные прядки окрашиваются хуже. Смывать краситель следует теплой водой, так как использование чересчур горячей может «вылиться» в изменение ровности покраски. В случае неудовлетворяющего результата провести очередное покрытие разрешается не раньше чем через четырнадцать дней. В любом случае проведение довольно агрессивной процедуры должно сопровождаться восстановительным процессом, суть которого заключается в приеме витаминных комплексов и использовании укрепляющих уходовых средств.

Если цвет корней лишь немного отличается от остальных локонов, профессионалы рекомендуют брать краску, не имеющую в составе аммиака. Она вполне справится с поставленной задачей, но при этом не нанесет вреда шевелюре. Когда цель заключается в покраске темных корней и имеется вероятность их пожелтения, в паре с краской можно воспользоваться девятипроцентной перекисью. Светлые локоны обрабатываются до состояния темных обычной краской, оттенок которой «ниже» на одну позицию.

Существует также рекомендация провести комплекс восстановительных процедур еще до начала окрашивания. Речь идет про увлажнение и питание шевелюры. Для этой цели можно воспользоваться подогретым маслом, нанесенным по всей длине волос и оставленным в среднем на полчаса под шапочкой из полиэтилена. Как другой вариант, это могут быть самодельные маски с эфирными маслами, яйцами и медом или же покупные с кератином в составе. Предварительное мытье головы не приветствуется в ситуации с осветлением, но вполне разрешается при затемнении локонов.

Однако волосы обязательно стоит промыть, если на них находятся какие-либо укладочные средства, способные при взаимодействии с красителем привести к проявлению неожиданной реакции.

Инструменты и материалы

Прикорневое окрашивание, как можно догадаться, требует использования краски, состав и оттенок которой будут зависеть от общего облика шевелюры. К примеру, темные волосы важно обработать таким средством, которое не вызывает появление желтизны. Помимо этого, покраска не может осуществиться без специальных инструментов: специальной кисточки и расчески с заостренным концом. Необходимы будут также емкость для смешивания компонентов красителя и заколки, фиксирующие волосы, ждущие своей обработки.

Касаемо краски, важно упомянуть, что специалисты советуют приобретать средство третьей степени стойкости, а не оттеночные красители, не способные справиться с поставленной задачей. Помимо этого, не стоит пытаться сэкономить, выбирая дешевые составы непроверенных фирм. Как правило, такие растворы содержат чересчур много аммиака, который не только негативно повлияет на состояние кожи головы и самих прядок, но даже сможет воздействовать на слизистую глаза. Специалисты также не рекомендуют покупать образцы с аммиаком женщинам, находящимся в положении либо кормящим грудью.

Как покрасить корни в домашних условиях?

Чтобы правильно покрасить самой себе дома отросшие корни волос, достаточно просто следовать инструкция, которая, как правило, присутствует внутри упаковки. Кстати говоря, делать это нужно в хорошо проветриваемом открытом пространстве. Составляющие раствора в указанном соотношении размешиваются в миске либо из пластика, либо из стекла. Безусловно, стоит защитить одежду старым полотенцем, полиэтиленом либо же надеть старую футболку или рубашку. Самостоятельно проводя окрашивание, обязательно следует надеть перчатки. Чтобы избежать пачканья кожи, то место ее стыка с шевелюрой стоит промазать жирным кремом.

Волосы разделяются на четыре одинаковые части ровными проборами (горизонтальным и вертикальным): лобную, затылок и пару височных. Каждую необходимо скрутить жгутиком, а после зафиксировать при помощи заколок. Краситель аккуратно наносится на прикорневую часть волоса в зоне затылка, которая будет окрашиваться максимальное количество времени из-за уменьшенной температуры. Расстегнув заколку, локон предстоит разделить на несколько прядок при помощи расчески или острия кисточки. Следом при использовании инструмента происходит равномерное распределение краски по длине волоса.

Обработав затылок, можно переходить ко лбу. Если краска попадает на кожу, то ее сразу же можно убирать намоченной в воде ваткой. Покраска лба и коротких прядок висков осуществляется в последнюю очередь, так как волосы здесь стремительно сохнут и меняют цвет. В целом прокрашивание всей головы должно уложиться в 20 минут, иначе оттенок всей шевелюры окажется в результате неравномерным. Зачесав волосы наверх и убрав их в шапочку из полиэтилена, пора выжидать время, как правило, указанное на инструкции.

Если же никаких сведений не имеется, то достаточно будет получаса. Специалисты также считают, что, если натуральный локон темнее, чем окрашенный, время обработки должно оказаться максимальным. Если же ситуация обстоит наоборот, то придерживаться следует нижней минимальной границы.

Следом волосы прочесываются, выжидается еще десяток минут. В той ситуации, когда предварительно делалась химическая завивка, время, указанное в инструкции, уменьшается на двадцать минут. Наконец, локоны пора промывать — лучше сделать это несколько раз. Малым объемом жидкости краску вспенивают, а затем уже смывают потоком воды. Сразу же разрешается использование любого укрепляющего средства, например бальзама. В большинстве случаев данное средство уже находится в упаковке с красителем. Просушивать голову лучше естественным путем, так как дополнительное воздействие фена на ослабшие локоны негативно скажется на их состоянии: пряди пересушатся и станут более ломкими.

В некоторых случаях достаточно только прикорневого окрашивания, без «растягивания» цвета. Это характерно для ситуаций, когда прошло не более месяца спустя первоначальной обработки, а также применялась качественная краска. Покрыв корни, достаточно будет хорошенько прочесать волосы, и никакой разницы между отдельными частями волоса заметно не будет. Если же цвет локонов перестал устраивать за минувшие 30 дней, то лучше освежить всю прическу: закончив с корнями, «растянуть» краску по всей длине или даже воспользоваться новой порцией раствора.

Советы

Если отрастают седые корни при общей окраске в блондинистый оттенок, то их рекомендуется обработать красителем, который на пару тонов светлее имеющегося. Пепельные красители применять не рекомендуется, так как они чаще всего создают акцент на седеющих прядках, которые хорошо бы скрыть. Используемое средство должно иметь в своем составе аммиак, так как отсутствие данного элемента приведет к неполной закраске седины. Удачнее всего использовать шестипроцентный раствор проверенных производителей.

Важно упомянуть, что большая концентрация обычно применяется для обесцвечивания, поэтому применять ее не стоит.

Русоволосым дамам предстоит закрашивать седину по той же схеме. Однако для гармоничного облика лучше соединить краситель выбранного цвета с натуральным русым тоном. Темноволосым женщинам достаточно будет воспользоваться обычной профессиональной краской черного цвета. Перед окрашиванием седые волоски придется подвергнуть процедуре ко-вошинг, суть которой заключается в мытье бальзамом, не имеющим в своем составе силиконы, без добавления шампуня. Так как поседевшая шевелюра отличается сухостью и низким уровнем абсорбции пигмента, ее придется предварительно увлажнить и напитать.

Кстати говоря, прокраску корней можно заменить мелированием прикорневой зоны. Суть его заключается в равномерном осветлении, не затрагивающем основную массу волос. Проведение данной процедуры в домашних условиях не требует особых усилий – достаточно запастись качественной краской и полосками фольги.

О том, как покрасить корни волос в домашних условиях, смотрите в следующем видео.

Методы окрашивания

Поскольку микробная цитоплазма обычно прозрачна, необходимо окрашивать микроорганизмы, прежде чем они будут видны в световой микроскоп. В некоторых случаях окрашивание не требуется, например, когда микроорганизмы очень большие или когда необходимо изучить подвижность, и каплю микроорганизмов можно поместить прямо на предметное стекло и наблюдать. Такая подготовка называется мокрым креплением . Влажную основу также можно приготовить, поместив каплю культуры на покровное стекло (стеклянную крышку для предметного стекла), а затем перевернув ее над полым предметным стеклом.Эта процедура называется «висящей каплей ».

При подготовке к окрашиванию небольшой образец микроорганизмов помещается на предметное стекло и сушится на воздухе. Мазок фиксируется нагреванием, быстро проводя его над пламенем. Термофиксация убивает микроорганизмы, заставляет их прилипать к предметному стеклу и позволяет им впитывать пятно.

Простые методы окрашивания. Окрашивание может выполняться с помощью основных красителей, таких как кристаллический фиолетовый или метиленовый синий, положительно заряженные красители, которые притягиваются к отрицательно заряженным материалам микробной цитоплазмы.Такой процедурой является простая процедура окрашивания . Альтернативой является использование красителя, такого как нигрозин или конго красный, кислых, отрицательно заряженных красителей. Они отталкиваются отрицательно заряженной цитоплазмой и собираются вокруг клеток, оставляя клетки прозрачными и неокрашенными. Этот метод называется методом отрицательного окрашивания .

Дифференциальные методы окрашивания. Метод дифференциального окрашивания различает два вида организмов. Примером может служить метод окраски по Граму . Этот дифференциальный метод разделяет бактерии на две группы: грамположительные бактерии и грамотрицательные бактерии. Сначала наносится кристаллический фиолетовый, а затем протравный йод, фиксирующий пятно (рисунок). Затем предметное стекло промывают спиртом, и грамположительные бактерии сохраняют кристально-фиолетовую окраску йода; однако грамотрицательные бактерии теряют окраску. Впоследствии грамотрицательные бактерии окрашиваются сафраниновым красителем, контркрашением, используемым следующим. Эти бактерии выглядят красными под масляной иммерсией, а грамположительные бактерии выглядят синими или пурпурными, что отражает кристаллический фиолетовый цвет, оставшийся на этапе промывки.

Другой метод дифференциального окрашивания - это кислотостойкий метод . Этот метод отличает виды Mycobacterium от других бактерий. Для переноса первого красителя, карболфуксина, в клетки используется тепло или липидный растворитель. Затем клетки промывают разбавленным кислотно-спиртовым раствором. Виды Mycobacterium устойчивы к действию кислоты и спирта и сохраняют окраску карболфуксина (ярко-красный). Другие бактерии теряют пятно и приобретают последующее окрашивание метиленовым синим (синим).Таким образом, кислотоустойчивые бактерии выглядят ярко-красными, в то время как некислотные бактерии кажутся синими при наблюдении под иммерсионной микроскопией в масле.

Другие методы окрашивания направлены на выявление различных важных бактериальных структур. Например, специальная техника окрашивания выделяет жгутиков бактерий, покрывая жгутики красителями или металлами для увеличения их ширины. Затем можно наблюдать окрашенные таким образом жгутики.

Для исследования спор бактерий используется специальный метод окрашивания. Малахитовый зеленый используется при нагревании, чтобы заставить пятно проникнуть в клетки и придать им цвет. Затем для придания цвета неспорообразующим бактериям используется контрастное краситель, сафранин. По окончании процедуры споры окрашиваются в зеленый цвет, а другие клетки окрашиваются в красный цвет.

Процедура окрашивания по Граму для разделения бактерий на две группы .

Другой метод дифференциального окрашивания - это кислотостойкий метод . Этот метод отличает виды Mycobacterium от других бактерий.Для переноса первого красителя, карболфуксина, в клетки используется тепло или липидный растворитель. Затем клетки промывают разбавленным кислотно-спиртовым раствором. Виды Mycobacterium устойчивы к действию кислоты и спирта и сохраняют окраску карболфуксина (ярко-красный). Другие бактерии теряют пятно и приобретают последующее окрашивание метиленовым синим (синим). Таким образом, кислотоустойчивые бактерии выглядят ярко-красными, в то время как некислотные бактерии выглядят синими при наблюдении под масляной иммерсионной микроскопией.

Другие методы окрашивания направлены на выявление различных важных бактериальных структур.Например, специальная техника окрашивания выделяет жгутиков бактерий, покрывая жгутики красителями или металлами для увеличения их ширины. Затем можно наблюдать окрашенные таким образом жгутики.

Для исследования спор бактерий используется специальный метод окрашивания. Малахитовый зеленый используется при нагревании, чтобы заставить пятно проникнуть в клетки и придать им цвет. Затем для придания цвета неспорообразующим бактериям используется контрастное краситель, сафранин. По окончании процедуры споры окрашиваются в зеленый цвет, а другие клетки окрашиваются в красный цвет.

.

% PDF-1.4 % 31 0 объект > endobj 33 0 объект > поток 1998-11-18T18: 17: 35Z2020-09-13T23: 47: 49-07: 002020-09-13T23: 47: 49-07: 00 Acrobat Distiller Command 3.01 для Solaris 2.3 и более поздних версий (SPARC) uuid: 84796796-1dd2- 11b2-0a00-c40927bd7200uuid: 8479679b-1dd2-11b2-0a00-880000000000application / pdf конечный поток endobj 9 0 объект > endobj 1 0 obj > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> endobj 11 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> endobj 15 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> endobj 18 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> endobj 45 0 объект [48 0 R] endobj 46 0 объект > поток H | WYsH ~ ϯ [GHf; 'LL * 5jm && ȿ ~ 4 @ V &>}} 5

5q = feVoT; 9 & h + M ^ 26Au! AWJpw 錫' / gq {: ꡷ g} Q pUn, 'u3 { yilzr \ 蜨 # Mo ^ & Q8 {͠vu 羛 Eq} C [t7N "1> q Ղ MFHY" ;; 9; jj Խ = 027, b1} qxkaltlJt0 ^ Ƣ4 {C $} @ eeU = ԌrW56 ڳ YA- # ~ ‚ߦ {1 뭬 X ؙ W \% r (S] r4gn ;; өtUa ^ M tp] o Z "܃ RQbt ؋ BOjr ފ gfk" ݎ Е.Zex = kk * SN | Yse- ׅ gY XPӭ5pa3lO􂑸ΐ> XFwSC ߂ [B # y @:] wbϚR =

.

Введение в окрашивание H&E: протокол, передовой опыт, шаги и многое другое: Leica Biosystems

Для рутинной диагностики использование гематоксилина и эозина (H&E) намного предпочтительнее для просмотра деталей клеточной и тканевой структуры патологами. Изменение интенсивности пятен часто определяется опытом патологоанатома и личными предпочтениями. Поскольку это окрашивание демонстрирует такой широкий спектр функций цитоплазматического, ядерного и внеклеточного матрикса, почти во всех учебных текстах используются изображения H&E.Сегодня мы продолжаем использовать это простое и незаменимое пятно, которое оставалось неизменным уже более века.

Получайте обновления Knowledge Pathway прямо на ваш почтовый ящик.

Подписка

Если вы просмотрели этот образовательный веб-семинар, тренинг или учебное пособие по программе Knowledge Pathway и хотели бы подать заявку на получение кредитов для продолжения образования в вашей сертифицирующей организации, загрузите форму, чтобы помочь вам добавить в свой транскрипт образовательные кредиты, о которых вы сообщили сами.

Подать заявку на самооценку образовательных кредитов
Рис. 1: Skin H&E.Обратите внимание на сбалансированную окраску этого участка кожи. Ядра окрашены в фиолетовый цвет, а компоненты цитоплазмы - в розовый.

Процедура окрашивания H&E следует базовому протоколу:

  • Депарафинизация
  • Обезвоживание
  • Гематоксилин
  • Дифференциация
  • Синение
  • Эозин
  • Обезвоживание
  • Очистка
  • Покровное стекло

Формат легко воспроизводится и воспроизводится реагенты достаточно эластичны, чтобы обеспечить постоянное окрашивание большого количества слайдов перед заменой реагентов.

Рис. 2: Двоеточие H&E. Обратите внимание на сбалансированную окраску в этой части толстой кишки. Реснички на цилиндрическом эпителии очень четкие.
Фотография предоставлена: Стэнли Хансен

В прошлом пятна и их компоненты обычно производились в лаборатории. Коммерчески доступные готовые реагенты были необычными и дорогими. Таким образом, в качестве экономичного способа выполнения H&E специалисты научились делать красители по мере необходимости.Задача заключалась в том, чтобы убедиться, что качество пятна остается неизменным. Разные техники следуют рецептам, используя свой индивидуальный подход, поэтому изготовление красителей обычно оставалось одним человеком. Тем не менее, в лаборатории было больше технических специалистов, поэтому время, необходимое для подготовки реагентов, не отнимало от общей рабочей нагрузки команды.

Рис. 3: Плацента H&E. Красные кровяные тельца в этом срезе плаценты представляют собой яркую окраску, которую можно получить с помощью этого простого красителя.Большое разнообразие комбинаций красителей гематоксилином и эозином позволяет добиться желаемых результатов с минимальными усилиями. По мере того, как все больше технических специалистов выходят на пенсию и компании становятся более экономичными, сокращение штата делает использование коммерчески доступных реагентов идеальным, потому что технические специалисты могут лучше сосредоточиться на внедрении и нарезке, которые являются областями лаборатории, которые предлагают наименьшую степень автоматизации.

Рис. 4. Клубочки (красная стрелка) и канальцы (синяя стрелка) H&E. Ядра окрашены в фиолетовый цвет, а компоненты цитоплазмы - в розовый.

Для новых профессионалов в области гистологии времена создания реагентов быстро уходят в прошлое. Я считаю, что этот сдвиг может быть проблематичным, прежде всего потому, что часть искусства, характерного для гистологии, утеряна. Одна из моих личных проблем при работе со студентами - помочь им устранить аномалии окрашивания. Когда пятна создаются в лаборатории, команда на собственном опыте узнает, что происходит, когда компонент отсутствует или неправильно добавлен в смесь.Эти изменения могут вызвать незначительные изменения в окрашенных слайдах, которые, как ожидается, в конечном итоге исправит команда гистологов. В конечном счете, новые группы гистологов могут столкнуться с трудностями при устранении незначительных изменений, которые можно легко исправить, не имея опыта создания реагентов и уроков, извлеченных в этом процессе.

Что в пятне H&E?

Окрашивание гематоксилином и эозином используется во многих областях гистологической лаборатории, включая замороженные срезы, тонкоигольные аспираты и залитые парафином ткани.Чтобы лучше понять, что делает слайд с хорошим окрашиванием, важно понимать состав пятен.

Гематоксилин используется для иллюстрации ядерных элементов в клетках. Глубина окраски зависит не только от количества ДНК в ядрах, но и от продолжительности времени, в течение которого образец находится в гематоксилине.

Гематоксилин - довольно простой в изготовлении краситель. Сам краситель добывается из дерева Hematoxylon campechianum. Окисление гематоксилина производит гематеин, который на самом деле является красителем, используемым для окрашивания H&E.Добавление протравы улучшает способность гематеина прикрепляться к анионным (отрицательно заряженным) компонентам тканей.

Рис. 5: На этом изображении крупноклеточной анапластической медубластомы гематоксилин играет ключевую роль в диагностике. Обратите внимание на митотические цифры, указывающие на быстрорастущую опухоль. В клетках также отмечается нерегулярность ядра и скопление хроматина. Фото: Frontalcortex.com

Гематоксилины обычно классифицируются по протраве, используемой перед окрашиванием.Протравы усиливают положительный ионный заряд гематина. Это способствует связыванию гематина с анионным тканевым компонентом, которым чаще всего является хроматин. Тип протравы также влияет на окончательный цвет окрашенных компонентов. Наиболее распространенная протрава, используемая в рутинной гистологии, - это сульфат алюминия-аммония (квасцы). Эта протрава заставляет ядра окрашиваться в красный цвет, который затем меняется на более знакомый синий цвет, когда образец позже промывают слабощелочным раствором.

Гематоксилин Майера - это гематоксилин квасцов, широко используемый краситель, который можно использовать как для прогрессивных, так и для регрессивных красителей.Его часто используют как ядерный контраст для специальных красителей и иммуногистохимии. Для этих целей Майер используется для окрашивания ядер, а затем их воронения без использования дифференциатора. Майер - краситель на водной основе.

Гематоксилин Харриса - еще один широко используемый гематоксилин квасцов, который можно использовать для прогрессивного окрашивания цитологических образцов, но также можно использовать для прогрессивного или регрессивного окрашивания в гистологии. Окрашивание дает четкие детали ядра.Одна из проблем при использовании Harris заключается в том, что его лучше всего дифференцировать с мягкой кислотой, в отличие от более часто используемых дифференциаторов на основе соляной кислоты. Харрис - это пятно на спиртовой основе. Гематоксилин Гилла - это гематоксилин квасцов. Его можно использовать как прогрессивное или регрессивное окрашивание, и он доступен в различных концентрациях. Поскольку в его состав входят вода и этиленгликоль, самоокисление пятна обычно предотвращается в течение нескольких месяцев, что делает его более устойчивым, чем гематоксилин Харриса. Однако природа Gills такова, что может происходить внеядерное окрашивание.Муцин и даже клей, используемый на предметном стекле, могут сильно загрязниться жабрами.

Гематоксилины, использующие соли железа в качестве протравы, обычно используются в специальных красителях. Это потому, что они могут демонстрировать больше тканевых структур, чем гематоксилины квасцов, такие как миелиновые и эластиновые волокна. Одно из самых известных - это пятно Вейгерта, которое используется в окрашивании Верхоффа-Ван Гизона, показанном на изображении.

Рис. 6: Обратите внимание на волокна эластина в аорте, окрашенные с помощью Verhoff-Van Gieson, также известного как эластичное окрашивание.Изменения в этих волокнах указывают на патологические процессы, которые иначе невозможно обнаружить. Фото: Стэнли Хансен

Рассмотрев ядерные пятна, давайте поговорим о красителях цитоплазматических компонентов. Эозин - это наиболее часто используемый контрастный краситель, который различает цитоплазму и ядра клеток. Обычно он розовый, с разными оттенками розового для разных типов волокон соединительной ткани.

Эозин Y - это наиболее часто используемая форма эозина, которую можно использовать как в воде, так и в спирте.Добавление небольшого количества уксусной кислоты также обострит окраску эозина. Эозин с добавлением флоксина усиливает красный цвет, наблюдаемый при окрашивании H&E. Итак, для тех, кто хочет видеть более насыщенные красные, можно добавить флоксин.

Рис. 7: Ядра на этом изображении имеют хороший контраст с цитоплазмой и эритроцитами (RBC) внутри кровеносного сосуда. Обратите внимание на интенсивность эритроцитов по сравнению с розовым цветом цитоплазмы окружающих клеток.

Многие лаборатории считают, что заказ красителей - самый простой способ обеспечить стабильное и воспроизводимое качество.Большое разнообразие комбинаций красителей гематоксилином и эозином позволяет добиться желаемых результатов с минимальными усилиями. По мере того, как все больше технических специалистов выходят на пенсию и компании становятся более экономичными, сокращение штата делает использование коммерчески доступных реагентов идеальным, потому что технические специалисты могут лучше сосредоточиться на внедрении и нарезке, которые являются областями лаборатории, которые предлагают наименьшую степень автоматизации.

Иногда используются другие смеси эозина, такие как EA50 и EA65. Эти красители в основном используются для цитологии и, помимо эозина Y, включают светло-зеленые, желтоватые и коричневые цвета Бисмарка.Добавление этих двух красителей обеспечивает изменение цвета цитоплазмы от бледно-голубого до розового, что лучше всего заметно в плоских клетках мазка Папаниколау. Концентрация смеси определяет обозначение 50 или 65.

Рис. 8: На этом изображении мазка Папаниколау с пациентом с плоскоклеточным раком можно оценить красоту разнообразной окраски цитоплазмы. Красная стрелка указывает на злокачественное ядро ​​с очень маленькой цитоплазмой. Черная стрелка показывает нормальные клетки острого воспаления, подобные по размеру эритроцитам на предыдущем изображении.Обратите внимание, насколько крупнее злокачественная клетка по сравнению с нормальными ядрами на предыдущем изображении.

Дифференциация пятен дает возможность выборочно удалять пятна с тканей по вкусу зрителя. В случае гематоксилина чаще всего используются соляная кислота (для быстрой дифференцировки) и уксусная кислота (для более медленной и контролируемой дифференцировки). Хотя соляная кислота (HCl) исторически была стандартом, более мягкие кислоты используются для более щадящего удаления красителя.Частично эта тенденция связана с использованием автоматического окрашивания, которое должно учитывать движение манипулятора в дополнение к времени, проведенному в реагенте.

Реагенты для синения, такие как «Водопроводная вода Скотта», используются для изменения цвета гематоксилина с красного на ожидаемый традиционный синий цвет. Эти слегка щелочные растворы химически изменяют краситель, вызывая это изменение цвета. В некоторых местах водопроводная вода содержит достаточно минералов, так что из-за pH вода становится достаточно щелочной, чтобы допускать посинение ядер без необходимости использования специального реагента для посинения.Однако в большинстве случаев лаборатории обычно добавляют этот шаг, чтобы обеспечить надлежащее воронение.

В сочетании эти компоненты составляют стандартную окраску, наиболее используемую в гистологической лаборатории.

Выбор протокола окрашивания H&E

Следующим шагом к получению хорошего окрашивания является определение желаемого типа окрашивания H&E. Обычно существует 3 типа окрашивания H&E: прогрессивное, модифицированное прогрессивное и регрессивное.

Прогрессирующее окрашивание происходит, когда гематоксилин добавляется к ткани без последующего дифференцирующего действия для удаления избытка красителя.Поскольку этап дифференцирования отсутствует, может происходить фоновое окрашивание, особенно заряженных или обработанных слайдов. Патологи иногда предпочитают этот тип окрашивания, потому что неклеточный материал, такой как муцин, окрашивается гематоксилином. Это внеклеточное окрашивание может быть индикатором хорошо дифференцированных опухолей.

Рис. 9: В этом отделе толстой кишки муцин все еще виден среди бокаловидных клеток.

Таблица: Этот протокол представляет собой простое регрессивное окрашивание, которое обеспечивает хороший баланс ядерных и цитоплазматических пятен.Этот протокол разработан с учетом слабого кислотного дифференциатора.

После того, как компоненты окрашивания выбраны, можно приступить к базовому протоколу. Оттуда отредактируйте либо гематоксилин с шагом 30 секунд, либо эозин с шагом 15 секунд. Помните, что эозин проникает гораздо быстрее. Если нет необходимости значительно осветлить или затемнить интенсивность окрашивания эозином, лучше всего подойдут более короткие интервалы. Также важно менять только одно пятно за раз.Может показаться, что гематоксилин перекрашен, когда эозина просто нужно побольше.

Поскольку лаборатории продолжают расти, потребность в стабильных результатах и ​​непрерывной пропускной способности становится все более актуальной. Воспроизводимость - важная часть качества лабораторных пятен. При ручном окрашивании, человеческие факторы могут сделать каждую окрашенную подставку для слайдов отличной от предыдущей. Добавление автоматизации не только устраняет возможность несоответствия, но также освобождает технологов для выполнения других задач в лаборатории.

Важно, чтобы был достигнут правильный баланс красителей. Перекрашивание гематоксилином может создать иллюзию недостаточно окрашенного эозина, так же как перекрашивание эозином может сделать гематоксилин более светлым, чем он есть на самом деле. Поэтому при оптимизации окраски убедитесь, что вы редактируете время только одного из компонентов. Этот прием избавит вас от необходимости тратить дополнительное время на корректировку пятна.

Ксилол 2 минуты
Ксилол 2 минуты
100% этанол 2 минуты
100% этанол 2 минуты
95% этанол 2 минуты
Промывка водой 2 минуты
Гематоксилин 3 минуты
Промывка водой 1 минута
Дифференциатор (слабокислый) 1 минута
Промывка водой 1 минута
Воронение 1 минута
Промывка водой 1 минута
95% этанол 1 минута
Eosin 45 секунд
95% этанол 1 минута
100% этанол 1 минута
100% этанол 1 минута
Ксилол 2 минуты
Ксилол 2 минуты
покровное стекло
Фиг.10: На этом изображении ядра в этом образце толстой кишки, кажется, подавляют другие клеточные компоненты. Даже красные кровяные тельца приглушены. Меньшее время в гематоксилине ИЛИ дополнительное время в эозине может обеспечить лучший баланс.
Рис. 11: Ядра в этом отделе почки теряются в розовом цвете эозина. Дополнительное время, проведенное в гематоксилине, сделало бы эти ядра более заметными.

При регрессивном и модифицированном прогрессивном окрашивании используется дифференциатор.Если дифференциатор изготовлен собственными силами, есть вероятность, что он окажется либо слишком слабым, либо слишком сильным. Оба сценария повлияют на окрашивание. Если дифференциатор сильнее, чем предполагалось, он удалит больше гематоксилина и сделает ядра бледными. Время тоже важно. Слишком много времени в правильно приготовленном дифференциаторе также приведет к удалению большего количества гематоксилина и, в конечном итоге, приведет к неокрашиванию ядер.

Умеренная кислотность имеет решающее значение для срока хранения гематоксилина. Без него щелочность ополаскивателя водопроводной водой повысит pH, так что озеро красителя может выпасть в осадок, и цвет изменится с вишнево-красного на пурпурно-красный.Периодическое добавление небольшого количества уксусной кислоты к гематоксилину поможет поддерживать соответствующий pH и может продлить жизнь пятна.

Вода используется как дифференциатор эозина. Обычно после стадии эозина используют 95% этанол. Этанол помогает ополаскивать предметное стекло, а вода вытягивает излишки эозина из тканей. Этот шаг может помочь контролировать окраску, но увеличение времени позволяет получить более светлые пятна, а сокращение времени поддерживает более яркое окрашивание.Однако избыток воды в ксилоле может продолжить процесс дифференциации, и его можно увидеть после заключения в виде розовой дымки на предметном стекле.

Не все ткани созданы одинаково. Кисты и образцы жировой ткани, даже при правильной обработке, могут быть очень трудно увидеть после окрашивания предметного стекла. Эти образцы часто имеют открытые пространства, где жидкость или жир находились в ячейке, а тонкость клеточных стенок может давать видимость света, когда окраска является просто артефактом тканевого типа.

Высококлеточные образцы (например, миндалины, лимфатические узлы) могут быть очень опасными. Помните, что у лимфоцитов мало цитоплазмы, и между клетками почти нет клеточного материала, как в других тканях. По этой причине гематоксилин не должен конкурировать с эозином. Компактная природа клеток также концентрирует ДНК, придавая этим высококлеточным тканям вид перекрашенных, хотя на самом деле их может просто нужно разрезать на более тонкие срезы.

Фиг.12: Лимфатический узел
Рис. 13: Почка - обратите внимание на различия между этим участком лимфатического узла и почки, оба сечения сечением 4 мкм. Эти образцы, окрашенные по одному и тому же протоколу, сильно различаются по внешнему виду из-за клеточности.

Использование чистых и свежих реагентов для депарафинизации необходимо для удаления парафина с предметного стекла перед добавлением красителей. Хотя ксилол является наиболее часто используемым растворителем, его заменители становятся все более популярными, поскольку считаются менее опасными и более экологичными.Вода в растворителях, вызванная загрязнением реагента или окружающей средой с высокой влажностью, снижает способность растворителя удалять парафин. Оставшийся парафин препятствует проникновению красителей в ткани, что делает их неровными.

Самый простой способ предотвратить это - чаще менять реагенты. Добавление небольшого количества гранул осушителя (около столовой ложки на емкость с реагентом) также уменьшит загрязнение воды растворителями. Эти меры особенно важны при использовании заменителя ксилола, поскольку эти реагенты, как правило, гораздо менее устойчивы к любому загрязнению водой, чем ксилол.

Пошаговое руководство по нанесению окрашивания H&E

Окрашивание гематоксилином и эозином (H&E) является наиболее широко используемым красителем в лабораториях гистологии и гистопатологии. При правильном выполнении он может демонстрировать широкий спектр нормальных и аномальных клеточных и тканевых компонентов, и, тем не менее, это относительно простое окрашивание для парафиновых или замороженных срезов. В гистопатологии большая часть случаев может быть диагностирована опытным патологом с использованием только окрашивания H&E.

Небольшое количество слайдов можно эффективно окрашивать вручную в лабораториях с высокой производительностью. Его можно успешно и последовательно выполнять с помощью автоматических аппаратов для окрашивания слайдов.

Существует ряд широко используемых составов гематоксилина и эозина, каждый из которых имеет различные преимущества и недостатки. Некоторые лаборатории предпочитают готовить собственные растворы, в то время как другие выбирают готовые к использованию коммерческие продукты.

Окраска H&E дает полное представление о микроанатомии органов и тканей.Гематоксилин точно окрашивает ядерные компоненты, включая гетерохроматин и ядрышки, в то время как эозин окрашивает цитоплазматические компоненты, включая коллаген и эластические волокна, мышечные волокна и эритроциты. В высококачественном H&E есть тонкие различия в оттенках цвета, создаваемые пятнами, особенно эозином, и это помогает в обнаружении и интерпретации морфологических изменений, связанных с заболеванием.

Важно, чтобы люди, выполняющие и оценивающие окрашивание H&E на качество, знали о тонкостях окрашивания, знали, чего можно достичь, если окрашивание правильно проводится с использованием высококачественных реагентов, и знали, что искать под микроскопом.Поддержание стабильных высококачественных окрашиваний H&E является фундаментальным требованием в лабораториях гистопатологии.

В следующих разделах описаны основные этапы окрашивания H&E.

Удаление воска

После приготовления парафиновой секции все элементы пропитываются парафиновым воском, который является гидрофобным и непроницаемым для водных реагентов, и окружается им. Большинство клеточных и тканевых компонентов не имеют естественного цвета и не видны.Первым шагом в нанесении окрашивания H&E является растворение всего парафина ксилолом (углеводородный растворитель).

Гидратация секции

После тщательной депарафинизации предметное стекло пропускают через несколько смен спирта для удаления ксилола, затем тщательно промывают водой. Срез теперь гидратирован, так что водные реагенты будут легко проникать в клетки и тканевые элементы.

Нанесите краситель для ядер гематоксилина

Теперь предметное стекло окрашено ядерным красителем, таким как гематоксилин Харриса, который состоит из красителя (окисленный гематоксилин или гематеин) и протравы или связывающего агента (соль алюминия) в растворе.Первоначально это окрашивает ядра и некоторые другие элементы в красновато-фиолетовый цвет.

Завершите "Ядерное пятно", "посинение"

После ополаскивания в водопроводной воде срез «вороняется» обработкой слабощелочным раствором. На этом этапе гематоксилин приобретает темно-синий цвет. Теперь срез можно промыть и проверить, правильно ли окрашены ядра, показать адекватный контраст и оценить уровень фонового окрашивания.

Удалить лишнее пятно фона (дифференцировать)

В большинстве случаев, когда используется гематоксилин Харриса, требуется этап дифференциации (обесцвечивания), чтобы удалить неспецифическое фоновое окрашивание и улучшить контраст.Используется слабокислый спирт. После такой обработки снова требуется посинение и тщательное полоскание. Методы окрашивания, которые включают этап обесцвечивания или дифференциации, называются «регрессивными» окрашиваниями.

Нанесите контрастное пятно Eosin Counterstain

Срез теперь окрашивают водным или спиртовым раствором эозина (в зависимости от личных предпочтений). Это окрашивает многие неядерные элементы в разные оттенки розового.

Промыть, обезвожить, очистить и закрепить (нанести покровное стекло)

После окрашивания эозином предметное стекло пропускают через несколько смен спирта для удаления всех следов воды, затем промывают в нескольких ваннах с ксилолом, который «очищает» ткань и делает ее полностью прозрачной.Наносится тонкий слой полистирола, а затем покровное стекло. Если окрашивание и все последующие этапы были выполнены правильно, на слайде будут обнаружены все важные микроскопические компоненты, и он будет стабильным в течение многих лет.

Устранение неисправностей H&E Stains

Хотя окрашивание H&E является относительно простым окрашиванием, существует множество артефактов, которые могут помешать хорошему окрашиванию.

Артефакты могут быть объяснены множеством причин.

Устранение неисправностей H&E Stains

Подготовка образцов тканей для гистологического исследования от пациента до патологоанатома требует осторожности, навыков и тщательных процедур. В этом руководстве представлены практические советы по передовым методам и простые способы избежать распространенных ошибок.

В этом разделе выделены советы по улучшению рутинного окрашивания и заключения покровных стекол. Мы надеемся, что каждый шаг станет ценным напоминанием о правильной гистологической практике, а также поможет в устранении неполадок, когда все же возникают неприемлемые результаты.

Хотите увидеть все 101 шаг к лучшей гистологии?

Щелкните здесь, чтобы загрузить копию сегодня!

Каждый шаг в протоколе окрашивания точно рассчитан по времени.

Время этапов окрашивания приблизительное, «если мы торопимся», некоторые этапы пропускаются. Это может дать стабильные результаты.

Эти срезы были вырезаны из одного блока на одинаковой толщине песка, вручную окрашенного H&E разными сотрудниками с использованием того же метода.Даже макроскопически можно увидеть несостоятельность пятна.

Контрольные слайды регулярно окрашивают для контроля качества окрашивания.

Контрольные слайды никогда не используются для пятен H&E. Это может затруднить определение того, вызвана ли проблема окрашивания плохими реагентами, несоответствующим протоколом или плохой фиксацией.

Этот участок почки включает в себя множество эозинофильных тканевых элементов и хорошо сохранившихся ядер, что позволяет надежно оценить качество окрашивания H&E.Плацента - это еще один тип образцов, который можно использовать в качестве полезного средства контроля.

Время перемешивания, стирки и слива оптимизировано для всех этапов окрашивания.

Время перемешивания, стирки и слива несовместимо. Растворители и реагенты быстро загрязняются. Окрашивание становится непостоянным.

Одним из преимуществ использования автоматического прибора для окрашивания является то, что время перемешивания, стирки и слива одинаковое. Если правильно контролировать другие переменные, это обеспечит хорошие и стабильные результаты.

Депарафинизация слайдов оптимизирована.

Депарафинизация предметных стекол иногда бывает неполной, и на предметных стеклах есть пятна остаточного воска. В результате на срезах образуются неокрашенные или неравномерно окрашенные участки.

На этом срезе, окрашенном H&E, виден большой неокрашенный участок слева и несколько более мелких участков, которые либо частично окрашены, либо неокрашены. Это связано с неполным удалением воска перед окрашиванием.

Растворители и окрашивающие реагенты регулярно меняются в зависимости от количества окрашенных слайдов или обработанных стоек.

Замена растворителей и окрашивающих реагентов происходит бессистемно. Их не заменяют, пока качество пятна не ухудшится.

В этом разделе показано некачественное мутное окрашивание гематоксилином. Этот реагент следует немедленно заменить.

Предметные стекла тщательно увлажняются перед окрашиванием гематоксилином.

Раствор гематоксилина быстро загрязняется спиртом, а иногда и ксилолом. Это вызывает неравномерное окрашивание.

Неравномерное окрашивание гематоксилином, видимое в эпидермисе на этом участке кожи, было вызвано остаточным ксилолом (и следами воска), присутствующим при нанесении гематоксилина.

Эффективность растворов гематоксилина тщательно контролируется. В течение срока службы растворы гематоксилина постепенно разбавляются переносом с предметных стекол и штативов, а также подвержены продолжающемуся окислению.

Окрашивание гематоксилином

меняется изо дня в день, и мы не пытаемся понять, почему.Например, площадь поверхности окрашивающей ванны, степень аэрации во время окрашивания и температура окружающей среды могут влиять на скорость окисления.

Показаны два слайда из одного блока управления. Их окрашивали H&E с использованием идентичных протоколов на автоматическом окрашивателе, но с интервалом в семь дней между запусками. Даже макроскопически разница в уровне окрашивания очевидна.

Тщательное «посинение» ядер щелочным заменителем водопроводной воды Скотта или аммиачной водой всегда проводится после окрашивания гематоксилином.На это требование влияет естественный pH водопроводной воды.

Иногда ядра выглядят розоватыми на завершенных срезах из-за неполного «посинения» в щелочной водопроводной воде после окрашивания гематоксилином. Ядра, которые недостаточно окрашены гематоксилином (или чрезмерно дифференцированы) и чрезмерно окрашены эозином, также выглядят розовыми.

A На этом участке ядра эпидермиса плохо выражены и имеют розоватый цвет. Этот участок не был должным образом «воронен» в щелочной воде после окрашивания гематоксилином (кожа, H&E).
B Это показывает другой участок, который был должным образом «воронен» после ядерного окрашивания. Здесь ядра выражены гораздо лучше (кожа, H&E).

«Посинение» сопровождается очень тщательной промывкой в ​​водопроводной воде для удаления остаточной щелочи, которая может препятствовать окрашиванию эозина и вызывать слабое и неравномерное окрашивание.

Неэффективная стирка после «посинения» (оставления остаточного калия) приводит к тому, что окрашивание эозином становится слабым и неравномерным.

В этом разделе показано влияние остаточного кали на окрашивание эозином.Обратите внимание на пятнистый характер пятна (селезенка, H&E).

Контролируется pH раствора эозина. Его pH поддерживается близким к 5,0 для поддержания оптимального окрашивания. Добавление пары капель уксусной кислоты может использоваться как удобное средство снижения pH.

Не предпринимается никаких попыток контролировать pH эозина. Когда интенсивность окрашивания спадает, раствор заменяют (вынос щелочной водопроводной воды может вызвать повышение pH растворов эозина).

Срез легкого, окрашенного H&E. Пятно эозина всегда очень слабое и совершенно неприемлемое. Обратите внимание, что единственные компоненты, окрашенные эозином, - это эритроциты.

Срезы тщательно обезвоживаются перед помещением в ксилол для очистки.

Срезы иногда быстро пропускают через спирт в ксилол. Очистка в ксилоле, загрязненном водой, может привести к появлению крошечных капелек воды в ткани, которые под микроскопом будут видны как непрозрачные участки с недостаточной детализацией.

Этому разделу не хватает ясности (невооруженному глазу он кажется непрозрачным). Тщательный осмотр показывает, что повсюду присутствуют крошечные капли воды.

Покровное стекло всегда наносится до того, как секция успеет высохнуть и не будет использована высококачественная среда. Необходимо знать о свойствах среды при длительном хранении, потому что кристаллы могут появиться в среде низкого качества - иногда через долгий период (месяцы или годы).

Срезы могут частично высохнуть перед нанесением покровного стекла, в результате чего некоторые ядра станут черными.Mountant, выбранный только на основании цены, может образовывать кристаллы во время длительного хранения, и покровные стекла могут подниматься.

A Этому участку дали возможность частично высохнуть перед тем, как надеть покров. Это привело к тому, что крошечные пузырьки воздуха застряли над некоторыми ядрами, что сделало их черными (иногда это называется «кукурузными хлопьями»).
B Срез покровного стекла, окрашенный H&E, демонстрирующий множество преломляющих сферокристаллов, которые образовались из некачественной среды в течение шести месяцев после монтажа.

Щелкните здесь, чтобы загрузить полную версию 101 шага к лучшей гистологии

Вебинары, обучающие презентации и сопутствующие материалы Leica Biosystems предоставляют общую информацию по конкретным темам и не предназначены и не должны рассматриваться как медицинские, нормативные или юридические консультации. Выраженные взгляды и мнения являются личными взглядами и мнениями докладчиков / авторов и не обязательно представляют или отражают взгляды или мнения Leica Biosystems, ее сотрудников или агентов.

При использовании любого продукта необходимо обращаться к информационным руководствам, вкладышам и руководствам по эксплуатации различных продуктов и устройств. Leica Biosystems и редакция не несут никакой ответственности, прямо или косвенно связанной с использованием устройств, методов или процедур, описанных в этих материалах.

Авторские права © Leica Biosystems Richmond Inc., 2019 г. Все права защищены. LEICA и логотип Leica являются зарегистрированными товарными знаками Leica Microsystems IR GmbH.

.

Морфология корней и каналов индийских премоляров верхней челюсти с помощью модифицированной техники окрашивания корневых каналов

 @article {Neelakantan2010RootAC, title = {Морфология корней и каналов индийских премоляров верхней челюсти с помощью модифицированной техники окрашивания корневых каналов}, автор = {P. Нилакантан, С. Суббарао и Рошни Ахуджа}, journal = {Odontology}, год = {2010}, объем = {99}, страницы = {18-21} } 
Целью этого исследования было изучить морфологию корней и каналов первого и второго премоляров верхней челюсти у индейцев с помощью модифицированной техники окрашивания каналов и очистки зубов.Были собраны первый (350) и второй (350) премоляры верхней челюсти, проанализированы морфология и количество корней. После чистки зубы погружали в тушь и помещали в барокамеру с кислородом при 0,6 МПа на 2 часа. Затем зубы были деминерализованы и очищены. Были исследованы цифровые изображения зубов… ПРОДОЛЖИТЬ ЧТЕНИЕ

Сохранить в библиотеку

Создать оповещение

Cite

Запустить поисковый канал

.

Смотрите также



Образ невесты Подготовка к свадьбе Организация свадьбы Развлечения на свадьбе Поздравления и тосты на свадьбу Свадебные приметы, горосокопы и гадания
Club Brides - Клуб Невест

Как показывают статистика и практика, в подавляющем большинстве случаев именно невеста является главным идеологом и главной движущей силой процесса подготовки к свадьбе.
Как подобрать счастливую дату свадьбы, как стильно и оригинально оформить свадебные приглашения, как выбрать самое красивое свадебное платье, какую сделать прическу, каким должен быть букет невесты, во что одеть подружек невесты, где организовать банкет, как оформить банкетный зал, какого фотографа и видеооператора пригласить… Вопросов при подготовке к свадьбе возникает сотни… Без совета и помощи не обойтись.
Свадебный портал «Клуб Невест» (Club Brides) посвящен всем самым главным вопросам, которые возникают у будущих молодоженов в процессе подготовки к свадьбе, а также всем тем вопросам и нюансам, которые необходимо учесть, чтобы свадьба стала действительно красивым, ярким, веселым и запоминающимся событием.
Мы подскажем вам, как подобрать счастливую дату свадьбы, как стильно и оригинально оформить свадебные приглашения, как выбрать самое красивое свадебное платье, какую сделать прическу, каким должен быть букет невесты, во что одеть подружек невесты, где организовать банкет, как оформить банкетный зал, какого фотографа и видеооператора пригласить и многое-многое другое…


2015- © Club Brides - Клуб Невест | Содержание | Карта сайта
Копировать материалы без размещения прямой активной ссылки на CLUBBRIDES.RU запрещено!